RNA不良影响慢病毒稳定株筛选

2021-12-13 03:18:39 来源:
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小分子RNA抑制技术是一种酪氨酸地截断某些等位特异性的深入研究暴力手段,在、狂犬病接种,遗传病及其它哮喘的疗法中均有广泛应用。比较慢狂犬病媒介是一类来源于重组成员逆转录狂犬病的媒介,由于具有可以接种非分裂期与分裂期细胞核,容纳大的外源性旨在 等位基因相片,免疫反应小等特点,现已成为转移旨在 等位基因进入动物细胞核的理想媒介。将比较慢狂犬病媒介应用于RNA抑制当中,可以酪氨酸抑制动物的各类细胞核中等位基因的表达,成为等位基因功能深入研究和等位基因疗法的有力暴力手段。目前深入研究得单单结论比较慢狂犬病媒介能在动物各类细胞核稳固表达siRNA,长期抑制等位特异性。为建立细胞核模型近期等位基因疗法提供有效性的深入研究暴力手段。

生博目前为客户挑选单单过几百种等位基因的抑制片断,并通过比较慢狂犬病得到几十种稳固细胞核株。为近期深入研究等位基因疗法提供了有效性依据。

BXXX1等位基因抑制稳固HeLa细胞核株协作

第一其余部分:BXXX1抑制媒介协作(媒介pMagic 4.1)

siRNA内部设计:

MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6

第二其余部分QPCR筛靶科学深入研究

Real-time PCR侦测结果显示: HeLa细胞核中,比较NC组成员, 四个靶点中,KD2,KD4对旨在等位基因BXXX1的表达的敲少效率降到80%以上,KD3对旨在等位基因BXXX1的表达的敲少效率也降到50%以上,都是有效性靶点。

第三其余部分Western blot内源验证科学深入研究报告

Western Blot侦测结果

探头说明:

M 为Marker;

1 CON为长时间旨在空细胞核(HeLa)探头;

2 NC为长时间旨在细胞核(HeLa),加阴性相符合狂犬病接种的细胞核探头(Negative Control);

3 KD为长时间旨在细胞核(HeLa),加RNAi靶点狂犬病接种的细胞核探头(Knock Down)

从Western Blot结果可以看单单,KD1,KD2靶点对HeLa细胞核BXXX1的表达有敲少效果,为有效性靶点。

第四其余部分:抑制比较慢狂犬病KD1.、相符合比较慢狂犬病CMV-GFP-L.V.接种HeLa细胞核株后挑选单单稳固株。

HeLa 白光组成员 White light电子显微镜组成员 Fluoresce 乙醇度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20

三、科学深入研究归纳:

1、HeLa细胞核接种KD1.比较慢狂犬病,MOI 10、MOI 20时疗效大,死细胞核多。若只计活细胞核,接种优点,都超过80%。

2、HeLa细胞核接种CMV-GFP-L.V.比较慢狂犬病,MOI 10、MOI 20时接种优点,都超过90%。

3、传代培养后,最终挑选单单单单HeLa- KD1 MOI 10稳固株,HeLa- KD1 MOI 20稳固株、HeLa- CMV-GFP MOI 20稳固株。

编辑: 刘

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